Evaluation of techniques for diagnosis of Trypanosoma vivax infections in naturally infected cattle in the Zona da Mata Mineira / Avaliação de técnicas para diagnóstico de infecções por Trypanosoma vivax em bovinos naturalmente infectados na Zona da Mata Mineira

Abstract This study aimed to evaluate diagnostic techniques for trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax, in naturally infected cattle in Minas Gerais, Zona da Mata. The deaths of six lactating cows with similar clinical conditions—characterized by hyporexia, hypogalactia, and recumbency—had been reported from one property. Initially, two animals were examined and diagnosed with trypanosomiasis through identification of the protozoan in a blood smear. After the initial diagnosis, all lactating cows (n=37) on the property were examined, and blood samples were collected for tests including whole blood smear, buffy coat smear, Woo's technique, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and polymerase chain reaction (PCR). Woo's test, buffy coat smears, and whole blood smears indicated that 4/37 (10.81%) animals were positive for trypanosomiasis, whereas ELISA and PCR indicated that 33/37 (89.19%) and 27/37 (72.97%) animals, respectively, were positive. The agreement obtained between parasitological techniques was classified as high, while between ELISA and PCR, no agreement. In conclusion, parasitological techniques have a low capacity to identify infected animals in the chronic stage of T. vivax infection. Therefore, techniques such as PCR and/or ELISA should be used to minimize the occurrence of false negatives.

Resumo Este estudo objetiva avaliar as técnicas de diagnóstico da tripanossomíase, causada pelo Trypanosoma vivax, em bovinos naturalmente infectados, em Minas Gerais, Zona da Mata. A morte de seis vacas em lactação com condições clínicas semelhantes - caracterizadas por hiporexia, hipogalaxia e decúbito - foi relatada em uma propriedade. Inicialmente, dois animais foram examinados e diagnosticados com tripanossomíase através da identificação do protozoário em esfregaço sanguíneo. Após o diagnóstico inicial, todas as vacas em lactação (n = 37) na propriedade foram examinadas, e amostras de sangue foram coletadas para testes, incluindo esfregaço de sangue total, esfregaço de capa leucocitária, técnica de Woo, ensaio imunoenzimático (ELISA) e reação em cadeia da polimerase (PCR). O teste de Woo, os esfregaços de capa leucocitária e de sangue total indicaram que 4/37 (10,81%) animais foram positivos para tripanossomíase, enquanto ELISA e PCR indicaram que 33/37 (89,19%) e 27/37 (72,97%) animais, respectivamente, foram positivos. A concordância entre técnicas parasitológicas foi classificada como alta, enquanto entre ELISA e PCR, sem concordância. As técnicas parasitológicas apresentam baixa capacidade para identificar animais infectados na fase crônica da infecção por T. vivax. Dessa forma, técnicas como PCR e/ou ELISA devem ser utilizadas para minimizar a ocorrência de falsos negativos.

Antibody prevalence of Leptospira spp. and Brucella abortus in domestic cats from Araguaína, Tocantins, North Region of Brazil / Prevalência de anticorpos para Leptospira spp. e Brucella Abortus em gatos domésticos de Araguaína, Tocantins, Região Norte do Brasil

Leptospira spp. and Brucella abortus are bacterial pathogens that can infect humans and animals. The present study aimed to detect anti-Leptospira and anti-B. abortus antibodies and verified the presence of factors associated with seropositivity in cats. One hundred and eighty serum samples were collected from domestic cats (Felis silvestris catus) from the urban area of the municipality of Araguaína-Tocantins by phlebocentesis of the cephalic and jugular veins. The samples were subjected to detection of anti-Leptospira and anti-B.abortus antibodies, respectively, by microscopic seroagglutination and buffered acidified antigen testing, followed by confirmation by the 2-mercaptoethanol test and slow seroagglutination in tubes. Data from the epidemiological questionnaire (the age, sex, origin, breed, and presence of clinical signs) were analyzed using Epi Info® software with seropositivity data found to search for associated factors using the chi-square test. In the present study, the prevalence of Leptospira spp. was 5.56% (10/180). However, no sample was reactive to B. abortus. None of the studied variables were associated with seropositivity for the pathogens evaluated. Therefore, there is contact between Leptospira spp. and the feline population of the municipality, indicating the possibility of the circulation of pathogenic serovars and that the presence of anti-Leptospira antibodies does not depend on the variables analyzed.

Leptospira spp. e Brucella abortus são patógenos bacterianos que podem infectar humanos e animais. O presente estudo teve como objetivo detectar anticorpos anti-Leptospira e anti-B.abortus e verificar a presença de fatores associados com a soropositividade em gatos. Foram coletadas 180 amostras de soro de gatos domésticos (Felis silvestris catus) da zona urbana do município de Araguaína-Tocantins por flebocentese das veias cefálica e jugular. As amostras foram submetidas à detecção de anticorpos anti-Leptospira e anti-B. abortus, respectivamente, por soroaglutinação microscópica e teste do antígeno acidificado tamponado, seguido de confirmação pelo teste de 2-mercaptoetanol e soroaglutinação lenta em tubos. Os dados do questionário epidemiológico (idade, sexo, procedência, raça e presença de sinais clínicos) foram analisados no software Epi Info® com os dados de soropositividade encontrados para pesquisa de fatores associados pelo teste do qui-quadrado. No presente estudo, a prevalência de Leptospira spp. foi de 5,56% (10/180). No entanto, nenhuma amostra foi reativa para B. abortus. Nenhuma das variáveis estudadas foi associada com a soropositividade para os patógenos avaliados. Portanto, há contato entre Leptospiraspp. e a população felina do município, indicando a possibilidade de circulação de sorovares patogênicos e que a presença de anticorpos anti-Leptospira independe das variáveis analisadas.

Follow-up of dairy cattle naturally infected by Trypanosoma vivax after treatment with isometamidium chloride / Acompanhamento de bovinos leiteiros naturalmente infectados com Trypanosoma vivax após tratamento com cloreto de isometamidium

Abstract Trypanosoma vivax infections cause nonspecific clinical signs in cattle associated with aparasitemic intervals, making disease diagnosis a challenge. In Brazil, diminazene aceturate and isometamidium chloride (ISM) are available to treat bovine trypanosomosis. The objective of this study was to follow-up, by molecular and serological techniques, dairy cattle naturally infected by T. vivax after ISM treatment. Thirty cattle naturally infected with T. vivax received two applications of ISM, at a dosage of 1.0 mg/kg intramuscularly, on days 0 and 150. For T. vivax diagnosis, EDTA-blood and serum samples were evaluated on 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, and 240 days after treatment PCR, Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) and ELISA. Animals with persistent detection of T. vivax DNA by both PCR and LAMP were found and continuous detection of anti-T. vivax IgG antibodies by ELISA, suggesting the presence of T. vivax resistance to ISM. The combination of LAMP and ELISA tests can prevent misdiagnosis of the parasite clearance in treated cattle, contributing to better disease control. This is the first experiment that demonstrates the persistence infection of T. vivax under ISM treatment in a natural infected herd and evidence of ISM chemotherapy-resistant T. vivax in Brazil.

Resumo Em bovinos, infecções por Trypanosoma vivax geram sinais clínicos inespecíficos que, associados a intervalos aparasitêmicos, faz com que o diagnóstico da enfermidade seja desafiador. No Brasil, somente aceturato de diaminazeno e cloridrato de isometamidum (ISM) estão disponíveis para o tratamento da tripanossomose bovina. Este trabalho teve como objetivo acompanhar bovinos leiteiros naturalmente infectados por T. vivax, após o tratamento com ISM por meio de técnicas moleculares e sorológica. Foram utilizados 30 bovinos naturalmente infectados com T. vivax, sendo estes tratados com duas aplicações de ISM, na dosagem de 1,0 mg/kg por via intramuscular profunda, nos dias 0 e 150. Foram avaliadas, para diagnóstico de T. vivax, amostras de sangue acrescido de EDTA e soro, colhidas nos 0, 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 e 240 dias após os tratamentos pela reação em cadeia da polimerase (PCR), amplificação circular isotérmica do DNA (LAMP) e ensaio de imunoabsorção enzimático (ELISA). Verificou-se a presença de animais com persistência na detecção de DNA de T. vivax pela PCR e LAMP, bem como detecção contínua de anticorpos IgG anti-T. vivax pelo método de ELISA, sugerindo a presença de resistência de T. vivax ao ISM. A combinação dos testes LAMP e ELISA pode evitar falsos diagnósticos da eliminação do parasita nos bovinos tratados, contribuindo para um melhor controle da doença. Este é o primeiro experimento que demonstra infecção persistente do T. vivax em rebanho naturalmente infectado, tratado com ISM, e evidencia possível resistência ao quimioterápico no Brasil.

Genetic diversity of Hepatozoon spp. in rodents from Chile / Diversidade genética de Hepatozoon spp. em roedores do Chile

Abstract This study aimed to investigate the genetic diversity of Hepatozoon spp. in rodents from Valdivia, Chile. A total of 74 rodents (synanthropic n=38; wild n=36) were trapped in Valdivia. We performed conventional PCR assays for Apicomplexa organisms targeting two overlapping 18S rDNA gene fragments (600 bp and 900 bp) followed by sequencing of selected amplicons. Hepatozoon spp. occurrence was 82.43% (61/74). Twelve sequences obtained from the 600 bp and ten from the 900 bp 18S rDNA fragments were identified as Hepatozoon sp. Six sequences obtained from 18S rDNA-based overlapping PCR protocols were used for concatenated (1,400 bp) phylogenetic, haplotype and distance analyses. Hepatozoon spp. 18S rDNA concatenated sequences from the present study were detected in Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus, and Abrothrix longipilis grouped with Hepatozoon species earlier described in rodents and reptiles from Chile and Brazil. Nucleotide polymorphism of the six 18S rDNA sequences (1,400 bp) from this study, and other Chilean sequences from rodents and rodent's ticks, showed high diversity with a total of nine Chilean haplotypes. Three haplotypes from Valdivia were identified for the first time in this study, suggesting the circulation of novel haplotypes in rodents from southern Chile.

Resumo Este estudo teve como objetivo investigar a diversidade genética de Hepatozoon spp. em roedores de Valdivia, Chile. Um total de 74 roedores (sinantrópicos n=38; selvagens n=36) foram capturados. PCR convencional foi realizada para organismos Apicomplexa, visando dois fragmentos sobrepostos do gene 18S rDNA (600 bp e 900 bp), seguida pelo sequenciamento de amplicons selecionados. A ocorrência de Hepatozoon spp. foi de 82,43% (61/74). Doze sequências obtidas dos fragmentos de 18S rDNA de 600 pb e dez dos fragmentos de 18S rDNA de 900 pb foram identificadas como Hepatozoon sp. Seis sequências obtidas, a partir de protocolos de PCR sobrepostos, foram usadas para análises filogenéticas (1.400 bp), de haplótipos e de distância. Sequências concatenadas 18S rDNA do presente estudo foram detectadas em Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus e Abrothrix longipilis e agrupadas com Hepatozoon descrito em roedores e répteis do Chile e do Brasil. A análise de polimorfismos das seis sequências deste estudo, junto com outras sequências chilenas de roedores e carrapatos de roedores, mostrou alta diversidade com um total de nove haplótipos no Chile. Três haplótipos detectados em Valdivia foram identificados pela primeira vez neste estudo, sugerindo que novos haplótipos circulam em roedores do sul do Chile.

High genetic diversity of Anaplasma marginale infecting dairy cattle in northeastern Brazil / Alta diversidade genética de Anaplasma marginale em bovinos de leite no nordeste do Brasil

Abstract Anaplasma marginale is an obligate intracellular Gram-negative bacterium found in ruminants' erythrocytes and is the etiological agent of bovine anaplasmosis. The bacterium's genetic diversity has been characterized based on sequences of major surface proteins (MSPs), such as MSP1α. The aim of the present study was to investigate the genetic diversity of A. marginale in cattle in the state of Maranhão, northeastern Brazil. To this end, 343 blood samples were harvested and subjected to iELISA assays using the recombinant surface protein MSP5. Out of 343 blood samples, 235 (68.5%) were randomly chosen and submitted to DNA extraction, qPCR and conventional PCR targeting the msp1α gene to determine amino acid sequences and classify the genotypes. The iELISA results showed 81.34% seropositivity (279/343), whereas qPCR revealed 224 positive samples (95.32%). Among these qPCR-positive samples, 67.4% (151/224) were also positive in the cPCR. Among the 50 obtained sequences, 21 strains had not been previously reported. Regarding the genotypes, H (26/50) and E (18/50) were identified most often, while genotypes F and C were only identified twice each and B and G once each. In conclusion, high prevalence and genetic diversity for A. marginale were observed in dairy cattle herds in the state of Maranhão.

Resumo Anaplasma marginale é uma bactéria Gram-negativa intracelular obrigatória de eritrócitos de ruminantes e responsável pela anaplasmose bovina. A diversidade genética de A. marginale tem sido caracterizada com base nas sequências das principais proteínas de superfície (MSPs), como a MSP1α. O objetivo deste estudo foi investigar a diversidade genética de A. marginale em bovinos no estado do Maranhão, Nordeste do Brasil. Dessa forma, 343 amostras de sangue foram submetidas ao ensaio iELISA, utilizando-se a proteína recombinante MSP5. Das 343 amostras de sangue, 235 (68,5%) foram escolhidas aleatoriamente e submetidas à extração de DNA, qPCR e PCR convencional para gene msp1α, para determinação das sequências de aminoácidos e classificação dos genótipos. Os resultados do iELISA mostraram 81,34% de soropositividade (279/343), enquanto qPCR revelou 224 amostras positivas (95,32%). Dentre estas na qPCR, 67,4% (151/224) mostraram-se positivas no PCR convencional. Das 50 sequências obtidas, 21 cepas não haviam sido relatadas anteriormente. Em relação aos genótipos, H (26/50) e E (18/50) foram os mais frequentes, enquanto os genótipos F e C foram identificados apenas duas vezes cada, e B e G uma vez cada. Em conclusão, alta prevalência e marcante diversidade genética de A. marginale foram observadas em rebanhos leiteiros no estado do Maranhão.

Serological occurrence for tick-borne agents in beef cattle in the Brazilian Pantanal / Ocorrência sorológica para agentes transmitidos por carrapatos em bovinos de corte no Pantanal Brasileiro

Abstract This study investigated the seropositivity for five different tick-borne agents, namely Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Coxiella burnetii, Anaplasma phagocytophilum, and Trypanosoma vivax in beef cattle in the Brazilian Pantanal. The serum samples collected from animals (200 cows; 200 calves) were used in indirect enzyme-linked immunosorbent assays (iELISA) to detect IgG antibodies against A. marginale, B. bovis, B. bigemina, and T. vivax, and Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) for detecting IgG antibodies against C. burnetii and A. phagocytophilum. No correlation was observed between seropositivity for C. burnetii and A. phagocytophilum with other agents whereas moderate correlation was observed for A. marginalexB. bigemina x B. bovis. Cows were more seropositive for T. vivax whereas calves were more seropositive for B. bovis and B. bigemina. The highest number of seropositive animals by a single agent was observed for T. vivax (15.2%). Co-seropositivity for T. vivax + A. marginale was higher in cows (25.5%) and for T. vivax + B. bovis + B. bigemina + A. marginale was higher in calves (57.5%). The high seropositivity correlation for A. marginale x B. bovis x B. bigemina is probably due to the presence of the tick biological vector, Rhipicephalus microplus, in the studied farms. Common transmission pathways, mediated by hematophagous dipterans and fomites, may explain the high co-seropositivity of cows for A. marginale and T. vivax. Low seropositivity to C. burnetii is probably due to the type of breeding system employed (extensive). Seropositivity for A. phagocytophilum in only one animal suggests the occurrence of a cross-serological reaction with another agent of the genus Anaplasma.

Resumo Este estudo teve como objetivo determinar a co-soropositividade para agentes transmitidos por carrapatos, como Anaplasma marginale, Babesia bovis, Babesia bigemina, Coxiella burnetii, Anaplasma phagocytophilum, e Trypanosoma vivax em bovinos de corte do Pantanal Brasileiro. Amostras de soro foram colhidas de 400 animais (200 vacas; 200 bezerros) e submetidas a Ensaios Imunoenzimáticos Indiretos (iELISA) para detecção de anticorpos IgG anti- A. marginale, anti- B. bovis, anti- B. bigemina e anti- T. vivax, e à Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detecção de anticorpos IgG anti -C. burnetii e anti- A. phagocytophilum. Ausência de correlação foi vista entre os animais soropositivos para C. burnetii e A. phagocytophilum com os outros agentes e correlação moderada ocorreu entre A. marginale x B. bigemina x B. bovis. Vacas foram mais soropositivas que bezerros para T. vivax e bezerros mais soropositivos que vacas para B. bovis e B. bigemina. Maior número de animais soropositivos para um único agente foi visto para T. vivax (15,2%). Vacas demonstraram maior co-soropositividade para T. vivax + A. marginale (25,5%) e bezerros para T. vivax + B. bovis + B. bigemina + A. marginale (57,5%). A alta correlação entre a soropositividade para A. marginale x B. bovis x B. bigemina é provavelmente devida à presença do vetor biológico, o carrapato Rhipicephalus microplus, nas fazendas estudadas. As vias de transmissão comuns, mediadas por dípteros hematófagos e fômites, podem explicar a alta co-soropositividade das vacas para A. marginale e T. vivax. A baixa soropositividade para C. burnetii é provavelmente devida ao tipo de sistema de criação empregado (extenso). A soropositividade para A. phagocytophilum em apenas um animal sugere a ocorrência de reação sorológica cruzada com outro agente do gênero Anaplasma.

Aortic valve endocarditis due to Bartonella clarridgeiae in a dog in Brazil / Endocardite de válvula aórtica por Bartonella clarridgeiae em um cão no Brasil

Abstract We report the first documented case of endocarditis associated with Bartonella clarridgeiae in a dog in Latin America. Infective vegetative valvular aortic endocarditis was diagnosed in a 10-year-old male mixed breed dog. The dog presented grade V/VI systolic and diastolic murmur, hyperthermia, and progressive weight loss. Cardiomegaly and presence of diffuse alveolar pattern in the lung fields were observed in the thorax radiography evaluation. Irregular and hyperechogenic structures adhered to the aortic leaflets, causing obstruction of the left ventricular outflow tract and severe aortic insufficiency, were observed in the echocardiography evaluation. A vegetative, whitish, hardened structure measuring 1.0 cm in diameter was observed in aortic semilunar valve at necropsy. Based on a combination of pre-enrichment insect-based medium liquid culture, quantitative real-time and conventional PCR assays based on nuoG and gltA genes, respectively, followed by sequencing and phylogenetic inferences, B. clarridgeiae DNA was detected in the patient's aortic valve lesions. Clinical, echocardiographic, anatomopathologic and molecular features supported the diagnosis of severe aortic vegetative endocarditis possibly caused by B. clarridgeiae in a dog in Brazil.

Resumo Relatamos o primeiro caso documentado de endocardite associada à Bartonella clarridgeiae em um cão na América Latina. Endocardite aórtica valvar vegetativa infecciosa foi diagnosticada em um cão sem raça definida de 10 anos de idade. O cão apresentou sopro sistólico e diastólico de grau V / VI, hipertermia e perda progressiva de peso. Cardiomegalia e presença de padrão alveolar difuso nos campos pulmonares foram observados na avaliação radiográfica do tórax. Estruturas irregulares e hiperecogênicas aderidas aos folhetos aórticos, causando obstrução da via de saída do ventrículo esquerdo e insuficiência aórtica grave, foram observadas na avaliação ecocardiográfica. À necropsia, foi observada uma estrutura vegetativa, esbranquiçada e endurecida medindo 1,0 cm de diâmetro na válvula semilunar aórtica. Por meio de uma combinação de cultura líquida baseada em meio de pré-enriquecimento de inseto, ensaios de PCR quantitativa em tempo real e convencional baseados nos genes nuoG e gltA, respectivamente, seguidos de sequenciamento e inferências filogenéticas, DNA de B. clarridgeiae foi detectado no tecido valvular lesionado do paciente. O diagnóstico de endocardite vegetativa aórtica grave, possivelmente causado por B. clarridgeiae em um cão no Brasil, foi apoiado por características clínicas, ecocardiográficas, anatomopatológicas e moleculares.

Serological evidence of exposure to Toxoplasma gondii and Neospora caninum in free-ranging Orinoco goose (Neochen jubata) in Brazil / Evidência sorológica de exposição à Toxoplasma gondii e Neospora caninum em Ganso-do-Orinoco (Neochen jubata) de vida livre no Brasil

Abstract Toxoplasma gondii and Neospora caninum are Apicomplexan intracellular protozoan parasites that affect numerous animal species, thus leading to severe diseases and economic losses, depending on the vertebrate species involved. The role of the avian species in maintaining and transmission of these coccidia has been studied for several years as they tend to serve as a potential source of infection for mammals and humans. The present study aimed to assess the serological exposure of Orinoco goose (Neochen jubata) to T. gondii and N. caninum. Between 2010 and 2013, 41 free-ranging Orinoco geese were captured in the Araguaia River, Brazil. The presence and titration of IgY antibodies to both coccidia were assayed via indirect immunofluorescent antibody test (IFAT). While IgY antibodies for N. caninum were present in 5 animals, with titers of 20, the antibodies for T. gondii were found in 35 animals, with titers ranging from 20 to 640. Considering that the Orinoco goose's meat is consumed by the local population in the studied area, it may represent an important source of T. gondii infection for humans. Due to its migratory behavior, this goose may play a pivotal role in the natural dispersion of both parasites. Furthermore, molecular studies are required for genotyping the isolates of T. gondii that occurs in this avian species.

Resumo Toxoplasma gondii e Neospora caninum são parasitas protozoários intracelulares do philo Aplicomplexa que afetam uma vasta gama de espécies animais, causando sérias doenças e levando a perdas econômicas, dependendo da espécie envolvida. O papel das aves na manutenção e transmissão destes coccídios tem sido estudado por anos, já que eles são potenciais fontes de infecção para outros animais e humanos. O objetivo deste estudo foi avaliar a exposição do Ganso-do-Orinoco (Neochen jubata) a T. gondii e N. caninum por meio de técnicas sorológicas. Entre os anos de 2010 e 2013, 41 Gansos-do-Orinoco de vida livre foram capturados no Vale do Rio Araguaia, Brasil. A presença e titulação de anticorpos IgY para ambos os coccídios foi obtida utilizando-se a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Enquanto a presença de anticorpos IgY para N. caninum foi detectada em 5 aves, com titulação 20, anticorpos para T. gondii foram encontrados em 35 aves, com títulos variando de 20 a 640. Considerando que a carne do Ganso-do-Orinoco é uma fonte de alimento para a população da área estudada, a ave pode representar uma importante fonte de infecção de T. gondii para humanos. Devido ao seu comportamento migratório, esta espécie assume grande importância na dispersão de ambos os parasitas. Estudos moleculares são necessários a fim de caracterizar genotipicamente os isolados de T. gondii que ocorrem nesta espécie de ave.

Molecular detection of vector-borne agents in cats in Southern Brazil / Detecção molecular de agentes transmitidos por vetores em felinos domésticos no Sul do Brasil

Abstract This study used serological and molecular methods to investigate the occurrence of vector-borne pathogens (VBP) with zoonotic potential in cats neutered at the University Veterinary Hospital in Canoinhas, Santa Catarina. The combined PCR and serological results revealed that 17 (56.6%) cats were positive for one or more pathogens. The sampled cats had antibodies to Ehrlichia spp. (7/30), Anaplasma phagocytophilum (3/30) and Leishmania infantum (2/30). The PCR assay detected DNA closely related to Ehrlichia canis in 6/30 cats, Mycoplasma haemofelis in 2/30 cats, A. phagocytophilum and Cytauxzoon sp. in one cat each. While Bartonella clarridgeiae and B. henselae were detected in two cats each, and B. koehlerae was detected in one cat.

Resumo Como os felinos podem ser parasitados por diversos patógenos transmitidos por vetores (PTV), alguns com caráter zoonótico, este estudo objetivou detectar por métodos sorológicos e moleculares, patógenos transmitidos por vetores hematófagos, em gatos atendidos em um Hospital Veterinário Universitário em Santa Catarina. Os resultados da PCR e da sorologia combinados, revelaram que 17 (56,6%) gatos foram positivos para um ou mais patógenos. Na sorologia, foram positivos 7/30 gatos para Ehrlichia, 3/30 para Anaplasma phagocytophilum e 2/30 para Leishmania infantum. Na PCR foi detectado DNA filogeneticamente associado a: Ehrlichia canis em 6/30 gatos; Mycoplasma haemofelis, em 2/30 gatos; A. phagocytophilum e Cytauxzoon sp. em 1/30 gatos cada. Enquanto Bartonella clarridgeiae e B. henselae foram detectadas, cada uma, em dois gatos, B. koehlerae foi detectada em um gato.

Hepatozoon sp. gamonts as an accidental finding in synovial liquid from an injured maned wolf (Chrysocyon brachyurus) in southeastern Brazil / Gamontes de Hepatozoon sp. como achado acidental em líquido sinovial de lobo guará (Chrysocyon brachyurus) no sudeste do Brasil

Abstract A free-living, adult male maned wolf (Chrysocyon brachyurus) was referred to the Governador "Laudo Natel" - FCAV/Unesp veterinary hospital after being found with skin lesions and a fracture on the right pelvic limb, which had to be amputated due to compromised integrity. Around 20 days later, bilateral accentuated swollen on humerus-radius-ulna articulation was observed. The synovial liquid was drained and sent to the laboratory for synovial cytology with Rosenfeld staining that revealed predominantly degenerated neutrophils with karyolytic chromatin associated with intracellular inclusions suggestive of Hepatozoon sp. gametocytes. Blood and synovial liquid samples were submitted to molecular analysis, aiming to amplify the Hepatozoon spp. 18S rRNA gene fragment. Despite the positioning of the found Hepatozoon sequence together with Hepatozoon canis previously detected in domestic carnivores, the BLAST analysis showed only 98% identity with H. canis. To the best of the authors' knowledge, this is the first time a Hepatozoon was detected in the synovial liquid by clinical pathology and molecular analyses.

Resumo Um lobo guará (Chrysocyon brachyurus) adulto, macho, de vida livre foi encaminhado para atendimento no hospital veterinário Governador "Laudo Natel" - FCAV/Unesp após ser encontrado com lesões de pele e fratura em membro pélvico direito, sendo amputado devido a comprometimento da integridade do membro. Aproximadamente 20 dias após a chegada ao hospital, foi notado acentuado aumento de volume bilateral em região de articulação úmero-rádio-ulnar. O líquido sinovial foi drenado e enviado para análise citológica com coloração de Rosenfeld, revelando a presença de neutrófilos degenerados com cromatina cariolítica associados a inclusões intracelulares sugestivas de gametócitos de Hepatozoon sp. Amostras de sangue e líquido sinovial foram submetidas a análises moleculares visando amplificar um fragmento do gene 18S rRNA de Hepatozoon spp. Apesar da sequência de Hepatozoon detectada se posicionar filogeneticamente no mesmo clado que H. canis previamente detectado em carnívoros domésticos, o resultado da análise do BLAST mostrou somente 98% de identidade com H. canis. De acordo com o conhecimento dos autores, esta é a primeira vez que Hepatozoon foi detectado no líquido sinovial por meio de patologia clínica e análises moleculares.

Frequency of antibodies and risk factors associated with Toxoplasma gondii infection in backyard pig production in the city of Mossoró, state of Rio Grande do Norte, Brazil / Frequência de anticorpos e fatores de risco associados à infecção por Toxoplasma gondii em criações de suínos em Mossoró, Rio Grande do Norte

Abstract Toxoplasmosis is an important zoonosis for pregnant women and immunosuppressed people. The pig population also becomes infected by this pathogen, and undercooked or raw meat is an important source of infection for humans. The aims of the present study were to evaluate the rate of exposure of pigs to T. gondii in the municipality of Mossoró, Rio Grande do Norte and seek to identify associations with possible risk factors. Blood samples were collected from 412 pigs and were analyzed using the immunofluorescence assay. Among these 412 serum samples, 40.7% were seropositive for T. gondii. The IgG antibody titers were 64 (56 specimens), 128 (32), 256 (37), 512 (23), 1024 (14), 2048 (5) and 4046 (1). Seropositivity for T. gondii was found to be related (p-value < 0.05) to the following factors: female gender, semi-confined rearing system, use of well water, dewormed animals, presence of cats, goats, sheep, mice and vultures on the farm and carcasses left on the ground. In contrast, seropositivity was not related (p-value < 0.05) to the age of the pigs, type of facility or feeding with human food remains. Preventive measures need to be adopted on the farms studied here, with the aim of decreasing the animals' intake of sporulated oocysts.

Resumo A toxoplasmose é uma importante zoonose para mulheres grávidas e pessoas imunossuprimidas. Os suínos também são infectados por este patógeno; e a carne crua ou malcozida é uma importante fonte de infecção para o ser humano. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a taxa de exposição suína à T. gondii no município de Mossoró, Rio Grande do Norte e identificar associações com possíveis fatores de risco. Amostras de sangue foram coletadas em tubos sem anticoagulante e o soro foi separado de 412 porcos e analisadas pelo ensaio de imunofluorescência. Dentre as 412 amostras de soro, 40,7% foram positivas para T. gondii. Os títulos para o anticorpo IgG foram 64 (56 amostras); 128 (32); 256 (37); 512 (23); 1024 (14); 2048 (5) e 4046 (1). A soropotividade para T. gondii foi relacionada (p-valor < 0,05) aos seguintes fatores: gênero feminino, sistema de criação de semi-confinamento, uso de água de poço, animais vermifugados, presença de gatos, cabras, ovelhas, ratos e urubus na fazenda e carcaças deixadas à céu aberto. Em contrapartida, a soropositividade não foi relacionada (p-valor < 0,05) à idade dos suínos, tipo de instalações ou alimentação com restos de comida humana. As adoções de medidas preventivas são necessárias na propriedade estudada, objetivando diminuir a ingestão de oocistos esporulados pelos animais.

Phylogeography of msp4 genotypes of Anaplasma marginale in beef cattle from the Brazilian Pantanal / Filogeografia de genótipos msp4 de Anaplasma marginale em gado de corte no Pantanal brasileiro

Abstract The msp4 gene of A. marginale is unicodon, stable and mostly homogeneous, being considered as a useful marker for phylogeographic characterization of this bacterium. The objective of this work was to analyze the phylogeography of A. marginale based on the msp4 gene in beef cattle from the Brazilian Pantanal, compared to those found in other regions worldwide. The blood samples investigated were collected from 400 animals (200 cows and 200 calves) reared in five extensive breeding farms in this region. The results indicated that of the evaluated samples, 56.75% (227/400) were positive for A. marginale based on the msp1β gene by quantitatitve PCR (qPCR), while 8.37% (19/227) were positive for the msp4 gene in the conventional PCR. In the Network distance analysis, 14 sequences from the Brazilian Pantanal were grouped into a single group with those from Thailand, India, Spain, Colombia, Parana (Brazil), Mexico, Portugal, Argentina, China, Venezuela, Australia, Italy and Minas Gerais (Brazil). Among 68 sequences from Brazil and the world, 15 genotypes were present while genotype number one (#1) was the most distributed worldwide. Both Splitstree and network analyses showed that the A. marginale msp4 sequences detected in beef cattle from the Brazilian Pantanal showed low polymorphism, with the formation of one genogroup phylogenetically related to those found in ruminants from South and Central America, Europe, and Asia.

Resumo O gene msp4 de A. marginale é unicodon, estável e pouco heterogêneo, sendo considerado como um marcador útil para caracterização filogeográfica desta bactéria. Este trabalho teve como objetivo analisar a filogeografia de A. marginale com base no gene msp4 em bovinos de corte do Pantanal Brasileiro, comparativamente a outra regiões do mundo. Alíquotas de sangue foram colhidas de 400 bovinos (200 vacas e 200 bezerros) em cinco propriedades de cria e recria extensiva. Como resultado, 56,75% (227/400) mostraram-se positivas para A. marginale pela qPCR para o gene msp1β e destas, 8,37% (19/227) amostras foram positivas na PCR convencional para o gene msp4. Na análise de distância Network, 14 sequências do Pantanal brasileiro foram agrupadas em um único grupo com as da Thailândia, Índia, Espanha, Colômbia, Paraná (Brasil), México, Portugal, Argentina, China, Venezuela, Austrália, Italia e Minas Gerais (Brasil). Dentre 68 sequências do Brasil e do mundo, constatou-se a presença de 15 genótipos, sendo o genótipo número um (#1) o mais distribuído. As sequências msp4 de A. marginale detectadas em bovinos de corte no Pantanal brasileiro apresentaram baixo polimorfismo com formação de dois genogrupos filogeneticamente relacionados àqueles encontrados em ruminantes de países das América do Sul e Central, Europa e Ásia.

Comparison of conventional and molecular techniques for Trypanosoma vivax diagnosis in experimentally infected cattle / Comparação de técnicas convencionais e moleculares para diagnóstico em bovinos experimentalmente infectados por Trypanosoma vivax

Abstract Livestock infections by Trypanosoma vivax have been occurring with increasing frequency, mainly due to the presence of animals with subclinical infections and without apparent parasitaemia, making diagnosis challenging. The aim of the present study was to evaluate several techniques used for T. vivax diagnosis in order to assess the best way of using them during the course of the disease. Molecular methods demonstrated higher rates of detection than parasitological methods, detecting 33 of the 54 (61.1%) known positive samples, while the hematocrit centrifugation technique (best parasitological test) detected only 44.4%. The serological methods, IFAT and ELISA, detected seropositivity in 51 of the 54 (94.4%) and 49 of the 54 (90.7%) known positive samples, respectively. Despite being highly sensitive, the latter only demonstrates exposure to the infectious agent and does not indicate whether the infection is active. The present study was the first to use the qPCR for a South American isolate, improving disease detection and quantification. Furthermore, the analyses revealed that the patent phase of the disease may extend up to 42 days, longer than previously reported. The combination of several diagnostic techniques can lower the frequency of false negative results and contributes toward better disease control.

Resumo Infecções por Trypanosoma vivax têm ocorrido com frequência crescente em animais de produção, principalmente pela aquisição de animais com infecções subclínicas e sem aparente parasitemia, o que dificulta o diagnóstico. O objetivo do presente estudo foi avaliar várias técnicas empregadas para o diagnóstico de T. vivax, a fim de verificar a melhor maneira de utilizá-las durante o curso da doença. Os métodos moleculares demonstraram maiores taxas de detecção que os métodos parasitológicos, detectando 33 das 54 (61,1%) amostras sabidamente positivas, enquanto a técnica de hemoconcentração (melhor teste parasitológico) detectou apenas 44,4%. Os métodos sorológicos, RIFI e ELISA, detectaram soropositividade em 51 das 54 (94,4%) e 49 das 54 (90,7%) amostras sabidamente positivas, respectivamente. Apesar de serem altamente sensíveis, estes testes apenas demonstram a exposição ao agente infeccioso, e não indicam se a infecção permanece ativa. O presente estudo foi o primeiro a utilizar a qPCR para um isolado sul-americano, melhorando sua detecção e quantificação. Além disso, as análises revelaram que a fase patente da doença pode se estender por até 42 dias após a infecção, sendo maior que anteriormente relatado. A combinação de várias técnicas de diagnóstico pode evitar a frequência de resultados falso-negativos e contribuir para um melhor controle da doença.

Coxiella burnetii associated with BVDV (Bovine Viral Diarrhea Virus), BoHV (Bovine Herpesvirus), Leptospira spp, Neospora caninum, Toxoplasma gondii and Trypanosoma vivax in reproductive disorders in cattle / Coxiella burnetii associada ao BVDV (Vírus da Diarreia Viral Bovina), BoHV (Vírus do Herpes Bovino), Leptospira spp, Neospora caninum, Toxoplasma gondii e Trypanosoma vivax em distúrbios reprodutivos em bovinos

Abstract This is a cross-sectional study to assess the presence of antibodies in ruminants against selected pathogens associated with reproductive disorders in cattle in four Brazilian states, including the zoonotic agent Coxiella burnetii. The used tests were Virus Neutralization Assay for IBR and BVD, Microscopic Agglutination Test for Leptospira spp., Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) for C. burnetii and Toxoplasma gondii, and Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Neospora caninum and Trypanosoma vivax. Seropositivity for C. burnetii was 13.7% with titers from 128 to 131,072; 57.8% for BoHV-1, with titers between 2 and 1,024; 47.1% for BVDV-1a, with titers from 10 to 5,120; 89.2% for N. caninum; 50% for T. vivax; and 52.0% for Leptospira spp., with titers between 100 to 800 (the following serovars were found: Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola, Copenhageni, Wolffi, Hardjo, Pomona and Icterohaemorrhagiae); 19.6% for T. gondii with titer of 40. This is the first study that has identified C. burnetii in cattle associated with BoHV and BVDV, N. caninum, Leptospira spp., T. gondii and T. vivax. Thus, future studies should be conducted to investigate how widespread this pathogen is in Brazilian cattle herds.

Resumo Este é um estudo transversal para avaliar a presença de anticorpos em ruminantes contra patógenos selecionados e associados a distúrbios reprodutivos em bovinos de quatro estados brasileiros, incluindo o agente zoonótico Coxiella burnetii. Os testes utilizados foram Teste de Vírus-Neutralização para BoHV e BVDV, teste de Aglutinação Microscópica para Leptospira spp., Reação de Imunofluorescência Indireta for C. burnetii e Toxoplasma gondii, e Ensaio de Imunoabsorção Enzimática para Neospora caninum e Trypanosoma vivax. A soropositividade para C. burnetii foi de 13,7% com títulos de 128 a 131.072; 57,8% para BoHV-1, com títulos entre 2 a 1.024; 47,1% para BVDV-1a, com títulos de 10 a 5.120; 89,2% para N. caninum; 50% para T. vivax; e 52,0% para Leptospira spp., com títulos entre 100 a 800 (sorovares encontrados: Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola, Copenhageni, Wolffi, Hardjo, Pomona e Icterohaemorrhagiae) 19,6% para T. gondii com título de 40. Este é o primeiro estudo que evidencia a participação de C. burnetii em bovinos associada ao Vírus da Rinotraqueíte bovina infecciosa e da diarreia viral bovina, N. caninum, Leptospira spp., T. gondii e T. vivax em bovinos. Desta forma, futuros estudos devem ser conduzidos a fim de investigar o quão disseminado se encontra este patógeno em rebanhos bovinos brasileiros.

Molecular detection of Mycoplasma suis in extensive pig production systems in the State of Maranhão, northeast Brazil / Detecção molecular de Mycoplasma suis em suínos de criações extensivas no estado do Maranhão, nordeste do Brasil

Abstract Mycoplasma suis is a bacterium that causes hemoplasmosis in pigs. This agent is capable of adhering to the surface of porcine erythrocytes, inducing structural changes on these cells. In Brazil, there are few reports about the disease, its causal agent, and the economic impact of this pathogen on pig production systems and farm sanitation. The present study aimed to investigate the occurrence of M. suis in extensive swine farms located in the counties of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario, State of Maranhão, northeast Brazil. For such purpose, 64 blood samples of pigs from these facilities were tested for M. suis using a 16S rRNA gene-based quantitative real-time PCR (qPCR); 82.3%, 65.2% and 25% of blood samples of swine from farms in the cities of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario were positive for M. suis by qPCR, respectively. This study shows, for the first time, that M. suis circulates in pig populations from the state of Maranhão, Northeast Brazil.

Resumo Mycoplasma suis é uma bactéria que causa a hemoplasmose em suínos. Este agente é capaz de se aderir à superfície dos eritrócitos de suínos, ocasionando deformações estruturais nestas células. No Brasil, poucos são os relatos acerca do parasita, da infecção e de seus impactos econômicos nas esferas produtiva e sanitária. O objetivo deste estudo foi investigar, por meio da PCR em tempo real quantitativa (qPCR) baseada no gene 16S rRNA, a ocorrência de M. suis em 64 amostras de sangue de suínos de criações extensivas dos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, localizados no estado do Maranhão. Foram obtidos um percentual de 82,3%, 65,2% e 25% de amostras positivas na qPCR para M. suis nos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, respectivamente. Este estudo mostra que M. suis circula entre os suínos de criações extensivas no estado do Maranhão.

Detection of a putative novel genotype of Ehrlichia sp. from opossums (Didelphis aurita) from Brazil / Detecção de um suposto novo genótipo de Ehrlichia sp. em gambás (Didelphis aurita) do Brasil

Abstract Erlichiosis affects humans and animals worldwide. Its distribution and prevalence depends on the presence of tick vectors and hosts in one geographic area. The aim of the present study was to investigate the occurrence of Ehrlichia spp. and Anaplasma spp. in opossums (Didelphis sp.) from the State of Rio de Janeiro, southeast Brazil. Blood samples from 37 animals were tested for these two pathogens using molecular methods. One animal (2.7%) was positive for Ehrlichia sp. by 16S rRNA-based nested PCR. In a phylogenetic analysis based on the 16S rRNA gene using the maximum likelihood method and the GTRGAMMA+I evolutionary model, we detected a novel Ehrlichia sp. genotype closely related to genotypes of E. canis previously reported in dogs from Brazil. To the authors' knowledge, this is the first molecular detection of Ehrlichia sp. in opossums from this State in the southeastern region of the country.

Resumo A erliquiose afeta seres humanos e animais em todo o mundo. Sua distribuição e prevalência dependem da presença de vetores de carrapatos e hospedeiros em uma área geográfica. O objetivo do presente estudo foi investigar a ocorrência de Ehrlichia sp. e Anaplasma sp. em gambás (Didelphis sp.) do Estado do Rio de Janeiro, sudeste do Brasil. Amostras de sangue de 37 animais foram testadas para estes dois patógenos usando métodos moleculares. Um animal (2,7%) foi positivo para Ehrlichia sp. baseado em 16S rRNA-nested PCR. Em uma análise filogenética baseada no gene 16S rRNA usando o método de máxima verossimilhança e o modelo evolutivo GTRGAMMA + I, detectamos um novo genótipo de Ehrlichia sp. intimamente relacionado a genótipos de E. canis previamente relatados em cães do Brasil. Para o conhecimento dos autores, esta é a primeira detecção molecular de Ehrlichia sp. em gambás deste estado na região sudeste do país.

Ehrlichia spp. infection in domestic cats from Rio de Janeiro State, southeast Brazil / Infecção de Ehrlichia spp. em gatos domésticos da Grande Rio de Janeiro, sudeste do Brasil

Abstract Ehrlichiosis is caused by agents belonging to Ehrlichia genus. Despite the frequent reports on the serological and molecular detection of E. canis in dogs in Brazil, there is scant data on ehrlichiosis in brazilian cats. This study aimed at investigating the occurrence of Ehrlichia spp. in domestic cats from Greater Rio de Janeiro, and evaluating hematological changes associated with this rickettsial infection. We searched for IgG antibodies against E. canis on blood samples of 216 cats by Indirect Fluorescence Assay (IFA). Additionally, we performed nested PCR (nPCR) and real-time PCR (qPCR) assays targeting E. canis-16S rRNA and dsb gene, respectively. Fifty-seven (26.4%) cats were seropositive for Ehrlichia spp. by IFA. Ehrlichia spp.-16S rRNA gene fragments were detected in 3 cats (1.4%). Although the obtained 16S rRNA sequences showed 99 to 100% identity with E. canis, cats were negative in qPCR. Anemia, thrombocytopenia, leukocytosis, left shift neutrophil and hyperproteinemia were observed. Anemia was statistically associated with seropositivity to E. canis and kittens showed lower positivity rates (p<0.05). This study showed that Ehrlichia spp. occur in domestic cats from Greater Rio de Janeiro. Further studies involving culture isolation are much needed to more precisely characterize these organisms.

Resumo A erliquiose é causada por agentes pertencentes ao gênero Ehrlichia . Apesar dos frequentes relatos de detecção sorológica e molecular de E. canis em cães no Brasil, existem poucos dados sobre a erliquiose em gatos brasileiros. Este estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de Ehrlichia spp. em gatos domésticos do Grande Rio de Janeiro e avaliar as alterações hematológicas associadas a essa infecção rickettsial. Procuramos anticorpos IgG anti-E. canis em amostras de sangue de 216 gatos por Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Além disso, foram realizados ensaios de nested PCR (nPCR) e PCR em tempo real (qPCR) para detecção dos genes E. canis-16S rRNA e dsb , respectivamente. Cinquenta e sete (26,4%) gatos foram soropositivos para Ehrlichia spp. pela RIFI. Fragmentos do gene rRNA de Ehrlichia spp.-16S foram detectados em 3 gatos (1,4%) por ensaios de nPCR. Embora as sequências 16S rRNA obtidas tenham 99 a 100% de identidade com E. canis, os gatos foram negativos nos ensaios de qPCR. Anemia, trombocitopenia, leucocitose, desvio nuclear neutrofílico à esquerda e hiperproteinemia foram observados. Anemia foi estatisticamente associada à soropositividade para E. canis e filhotes apresentaram menores taxas de positividade (p <0,05). Este estudo demonstra que Ehrlichia spp. ocorrem em gatos domésticos da Grande Rio de Janeiro. Outros estudos envolvendo o isolamento por cultura são necessários para caracterizar com mais precisão esses organismos.

Molecular detection of Mycoplasma suis in extensive pig production systems in the State of Maranhão, northeast Brazil / Detecção molecular de Mycoplasma suis em suínos de criações extensivas no estado do Maranhão, nordeste do Brasil

Mycoplasma suis is a bacterium that causes hemoplasmosis in pigs. This agent is capable of adhering to the surface of porcine erythrocytes, inducing structural changes on these cells. In Brazil, there are few reports about the disease, its causal agent, and the economic impact of this pathogen on pig production systems and farm sanitation. The present study aimed to investigate the occurrence of M. suis in extensive swine farms located in the counties of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario, State of Maranhão, northeast Brazil. For such purpose, 64 blood samples of pigs from these facilities were tested for M. suis using a 16S rRNA gene-based quantitative real-time PCR (qPCR); 82.3%, 65.2% and 25% of blood samples of swine from farms in the cities of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario were positive for M. suis by qPCR, respectively. This study shows, for the first time, that M. suis circulates in pig populations from the state of Maranhão, Northeast Brazil.

Mycoplasma suis é uma bactéria que causa a hemoplasmose em suínos. Este agente é capaz de se aderir à superfície dos eritrócitos de suínos, ocasionando deformações estruturais nestas células. No Brasil, poucos são os relatos acerca do parasita, da infecção e de seus impactos econômicos nas esferas produtiva e sanitária. O objetivo deste estudo foi investigar, por meio da PCR em tempo real quantitativa (qPCR) baseada no gene 16S rRNA, a ocorrência de M. suis em 64 amostras de sangue de suínos de criações extensivas dos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, localizados no estado do Maranhão. Foram obtidos um percentual de 82,3%, 65,2% e 25% de amostras positivas na qPCR para M. suis nos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, respectivamente. Este estudo mostra que M. suis circula entre os suínos de criações extensivas no estado do Maranhão.

Molecular detection of vector borne pathogens in anemic and thrombocytopenic dogs in southern Brazil / Detecção molecular de patógenos transmitidos por vetores em cães anemicos e trombocitopenicos no Sul do Brasil

Abstract Arthropod-borne pathogens are medically important because of their ability to cause diseases in their hosts. The purpose of this study was to detect the occurrence of Ehrlichia spp., piroplasmids and Hepatozoon spp. in dogs with anemia and thrombocytopenia in southern Brazil. EDTA-whole blood was collected from 75 domestic dogs presenting anemia or/and thrombocytopenia from Guarapuava, state of Paraná, Brazil. DNA samples were subjected to conventional PCR assays for Ehrlichia spp. (dsb), piroplasmids (18S rRNA) and Hepatozoon spp. (18S rRNA), followed by sequencing and phylogenetic analyses. Among the 75 dogs, one (1.33%) was positive for Hepatozoon sp. and six (8%) were positive for piroplasmids in 18S rRNA cPCR assays. None of the dogs showed positive results in Ehrlichia spp.-cPCR targeting dsb gene. The phylogenetic analyses revealed that three piroplasm sequences were clustered with Rangellia vitalii, while one sequence was grouped with B. vogeli. The only sequence obtained from Hepatozoon spp.-PCR protocol was pooled with H. canis. Therefore, there is urgent need for differential molecular diagnosis of the two piroplasm species cited as etiological agents in clinical cases of canine hemoparasitic diseases, given the higher pathogenic potential of R. vitalii than of B. vogeli.

Resumo Agentes transmitidos por artrópodes têm grande importância na medicina veterinária devido à sua capacidade de causar doenças graves em seus hospedeiros. O presente estudo objetivou investigar a ocorrência de três patógenos transmitidos por vetores, Ehrlichia canis, Rangelia vitalii e Hepatozoon canis, em cães na região sul do Brasil. Foram coletadas amostras de sangue total de 75 cães domésticos que apresentavam anemia e/ou trombocitopenia, em Guarapuava, Paraná, Brasil. As amostras de DNA foram submetidas à técnica de PCR convencional para E. canis (dsb), piroplasmídeos (18S rRNA) e Hepatozoon spp. (18S rRNA), seguida de sequenciamento e análises filogenéticas. Das 75 amostras, uma (1,33%) foi positiva para Hepatozoon spp. e seis (8%) foram positivas para Babesia spp. Nenhuma amostra mostrou resultados positivos para Ehrlichia spp. utilizando a detecção pelo gene dsb. As análises filogenéticas revelaram que três sequências obtidas foram agrupadas no mesmo clado que R. vitalii , enquanto uma foi agrupada juntamente com B. vogeli. A única sequência obtida pelo protocolo de PCR para Hepatozoon spp. foi agrupada juntamente com H. canis. Assim, é justificada necessidade de diferenciação das espécies de piroplasmas, através do diagnóstico molecular, como agentes etiológicos nos casos clínicos de hemoparasitose canina, considerando o potencial patogênico de R. vitalii quando comparado à B. vogeli.

Hemotropic mycoplasmas in naturally infected cats in Northeastern Brazil / Micoplasmas hemotróficos em gatos naturalmente infectados no Nordeste do Brasil

Abstract This study aimed to determine the prevalence, factors associated, laboratory findings (with and without coinfection by retroviruses) among naturally infected cats by hemoplasmas in northeastern Brazil. For convenience, 200 domesticated and healthy cats were selected. Blood samples were taken to perform complete blood counts, serum biochemical, immunochromatography tests and nPCR for FIV and FeLV, and PCR for hemoplasma recognition. An interview was conducted to determine the factors associated with hemoplasmas. A total of 71/200 (35.5%) cats were positive for at least one hemoplasma species. Isolated infections were observed in 12,5% for 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 12% for Mycoplasma haemofelis and 3% for 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Regarding copositivity, 2% of the animals were positive for M. haemofelis and 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 1.5% for M. haemofelis and 'Candidatus Mycoplasma turicensis', and 4.5% for ' Candidatus Mycoplasma haemominutum' and 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. No clinical and laboratory changes were observed in the animals that were concomitantly positive for retroviruses and hemoplasmas. Periurban region cats were more likely to be infected by M. haemofelis, while contact with other cats and infection by ' Candidatus Mycoplasma turicensis' were associated with 'Candidatus Mycoplasma haemominutum'. This study indicates that infection by hemoplasmas is a common find in cats from northeastern Brazil.

Resumo Objetivou-se com este estudo determinar a prevalência, fatores associados, achados laboratoriais (com e sem coinfecção com retrovírus) em gatos naturalmente infectados por hemoplasmas no Nordeste do Brasil. Selecionou-se, por conveniência, 200 gatos domiciliados, hígidos, sendo colhidas amostras de sangue para realização do hemograma, bioquímica sérica, imunocromatografia e nested-PCR para FIV e FeLV, e PCR para identificação dos hemoplasmas. Uma entrevista foi realizada para determinação dos fatores associados aos hemoplasmas. A frequência de positividade foi de 35,5% (71/200). Infecções isoladas foram observadas em 12,5% dos animais para 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 12% para Mycoplasma haemofelis e 3% para 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Quanto a co-positividades, 2% dos animais foram positivos para M. haemofelis e 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 1,5% foram positivos para M. haemofelis e 'Candidatus Mycoplasma turicensis', e 4,5% foram positivos para 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' e 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Não foram observadas alterações clínicas ou laboratoriais nos animais positivos para retrovírus e hemoplasmas, concomitantemente. A região periurbana foi identificada como fator de risco associado a M. haemofelis. Enquanto o contato com outros gatos e a infecção por 'Candidatus Mycoplasma turicensis' foi associado à 'Candidatus Mycoplasma haemominutum'. Este estudo indica que a presença dos agentes da micoplasmose hemotrópica felina é comum no Nordeste brasileiro.